Activation tagging l Promoter trapping

Activation Tagging


 유전자가 가지고 있는 기능을 밝히는 방법으로 광범위하게 사용되는 돌연변이 작성법 중, 화학적·물리적인 방법과 T-DNA를 삽입시키는 방법은 유전자의 일부 혹은 전부가 파괴되면서 유전자가 가지고 있는 고유의 기능이 사라지게 되므로, 이를 이용하여 그 유전자의 기능을 유추할 수 있다. 그러나 이러한 방법에 의해 형성된 돌연변이는 연관성을 띠는 다른 유전자들의 존재에 의해 표현형으로 나타나지 않거나, 중요한 유전자일 경우 식물의 치사(lethality)를 유발할 수도 있는 단점이 있다. 이와 달리 activation tagging은 T-DNA가 유전자의 염기서열을 파괴하지 않고 그 유전자의 발현을 인위적으로 활성화(activation) 시키므로 유전자의 기능 확인을 위한 후속 연구를 가능하게 하는 장점이 있다.



작용 원리
T-DNA를 삽입시킬 수 있는 부위(right border와 left border)와 전사를 증폭시키는 유전자 서열(transcriptional enhancer sequence)을 조합하고 여기에 유전자를 분리할 때 사용하는 유전자를 붙인 운반체(vector)를 이용한다. 식물의 형질전환으로 T-DNA가 염색체에 삽입될 때 전사증폭 유전자 서열에 의해서 T-DNA에 인접한 유전자가 활성화되면서 발현이 증가한다. 발현이 증가되어 나타난 변이체로부터 운반체의 꼬리표(tag)를 이용하여 유전자를 분리한다.

Experimental flow


적용 분야 (Organism base/Cell base)
- 애기장대를 이용한 activation tagging

 식물에서 모델 식물로 사용되는 애기장대(Arabidopsis thaliana)에 activation tagging을 이용하여 대량의 변이체를 확보하고, 그것을 이용하여 환경 스트레스 인자와 관련된 변이체를 선발하고 유전자를 분리한다.

Experimental flow


- 세포를 이용한 activation tagging

 세포 수준에서 activation tagging 기술을 적용하여 식물의 이차 대사산물 중 유용물질의 생산과 관련된 유전자를 대량으로 발굴하고 세포주화 연구를 수행한다.